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酵母双杂交技术不仅应用于哺乳动物蛋白质之间的相互作用研究,还可以用来研究高等植物蛋白质之间的相互作用。其基本原理是酵母的转录激活因子GAL4由两个可以分开的、功能上相互独立的结构域(domain)组成,N端有一个由147个氨基酸组成的DNA结合域(DNA binding domain,BD),C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域(transcription activation domain,AD)。BD可以和上游激活序列(upstream activating sequence,UAS)结合,而AD则能激活UAS下游的基因进行转录。但是,单独的BD或AD不能激活基因转录,它们之间只有通过某种方式结合在一起才具有完整的转录激活因子的功能。酵母双杂交系统主要利用酵母的GAL4的这个特性通过两个杂交蛋白在酵母细胞中的相互结合及对报告基因的转录激活来研究活细胞内蛋白质的相互作用。
服务内容
•酵母双杂cDNA文库构建
•诱饵载体构建
•转化酵母细胞
•诱饵质粒酵母细胞的毒性检测
•诱饵蛋白的自激活验证
•验证诱饵蛋白与靶蛋白的互作
•文库筛选测序
•阳性克隆回复杂交验证
•提供完整的实验图片以及报告单,文库质粒
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